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如何选择内参标签抗体
发布时间:2019-11-13 14:34 来源:市场部

经常会有小伙伴们觉得内参抗体和标签抗体不知如何选择,今天小编将常用的标签抗体和内参抗体进行整理,以期为大家带来帮助。

内参抗体

内参顾名思义,是一种参照物,可以监测整个试验体系是否正常,比如蛋白提取过程,转膜体系,显色体系等也可以用来比较在不同条件下,不同细胞组织中目的蛋白表达量的差异内参抗体一般选用管家基因表达的蛋白,它们在各个组织细胞中表达相对恒定,不会因为外部条件变化而引起表达量的变化。

选择内参抗体的时候需要关注以下几个方面:

样本来源

如果是哺乳动物的组织或细胞,主要以 ActinTubulinGAPDHLamin B1PCNA 为代表;

如果是植物样本,主要以 actinGAPDH 为代表。

目的蛋白分子量

常见内参蛋白β Actinβ TubulinGAPDH 的分子量分别是 42kd50kd37kd目的蛋白分子量最好能与内参蛋白分子量相差 5kd 以上,这样才能分开目的蛋白和内参;

目的蛋白表达部位

全细胞蛋白或胞浆:Tubulinβ Actin、GAPDH 等;

细胞核蛋白PCNA 等;

核膜蛋白:Lamin B1 等;

胞膜蛋白:Na(+)/K(+) ATPase 

全血/血清/血浆:Albumin

 

标签抗体

首先来看下蛋白标签,蛋白标签是利用DNA体外重组技术,与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白,以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随着技术的不断发展,相继开发得到具有各种不同功能的蛋白标签,常见的蛋白标签有His、FlagGSTMBPHAMycGFP 等。

标签抗体是一类经过亲和纯化的单克隆抗体其原理是抗原抗体反应,这些标签抗体可以高度特异地结合对应的标签蛋白进而通过特异性标签抗体对其鉴定与纯化,以达到研究的需求。标签抗体是开展基因蛋白表达、信号转导和基因功能研究的常用工具。





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