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如何选择内参标签抗体
发布时间:2019-11-13 14:34 来源:市场部

经常会有小伙伴们觉得内参抗体和标签抗体不知如何选择,今天小编将常用的标签抗体和内参抗体进行整理,以期为大家带来帮助。

内参抗体

内参,顾名思义,是一种参照物,可以监测整个试验体系是否正常,比如蛋白提取过程,转膜体系,显色体系等;也可以用来比较在不同条件下,不同细胞组织中目的蛋白表达量的差异。内参抗体一般选用管家基因表达的蛋白质,它们在各个组织细胞中表达相对恒定,不会因为外部条件变化而引起表达量的变化。

选择内参抗体的时候需要关注以下几个方面:

样本来源

如果是哺乳动物的组织或细胞,主要以 Actin、Tubulin、GAPDH、Lamin B1、PCNA 为代表;

如果是植物样本,主要以 actin、GAPDH 为代表。

目的蛋白分子量

常见内参蛋白β Actin、β Tubulin、GAPDH 的分子量分别是 42kd,50kd,37kd。目的蛋白分子量最好能与内参蛋白分子量相差 5kd 以上,这样才能分开目的蛋白和内参;

目的蛋白表达部位

全细胞蛋白或胞浆:Tubulin、β Actin、GAPDH 等;

细胞核蛋白: PCNA 等;

核膜蛋白:Lamin B1 等;

胞膜蛋白:Na(+)/K(+) ATPase 等;

全血/血清/血浆:Albumin。

 

标签抗体

首先来看下蛋白标签,蛋白标签是利用DNA体外重组技术,与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白,以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。随着技术的不断发展,相继开发得到具有各种不同功能的蛋白标签,常见的蛋白标签有His、Flag、GST、MBP、HA、Myc、GFP 等。

标签抗体是一类经过亲和纯化的单克隆抗体,其原理是抗原—抗体反应,这些标签抗体可以高度特异地结合对应的标签蛋白,进而通过特异性标签抗体对其鉴定与纯化,以达到研究的需求。标签抗体是开展基因蛋白表达、信号转导和基因功能研究的常用工具。





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