逆转录(reverse transcription)是以RNA为模板合成DNA的过程,即RNA指导下的DNA合成。此过程中,核酸合成与转录(DNA到RNA)过程与遗传信息的流动方向相反(RNA到DNA),故称为逆转录。由于RNA的不稳定性,逆转录广泛应用于基因表达研究中。
金普来逆转录酶为三代逆转录酶,反应温度从原有的42℃升为50℃,能够更好地打开RNA的二级结构得到完整的cDNA。更高的反应温度使酶具有更高的效率,能更好地应对RNA的复杂结构。第三代逆转录酶还具有更强的抑制剂耐受性,能更好地反转录Trizol所提取的RNA。
金普来第一代5×逆转录预混液(RT-Mix)是一款快速方便、减少污染的一链cDNA 合成试剂盒,包含RTase 及其反应 Buffer、RNA 酶抑制剂、dNTPs, Oligo(dT)20VN 和随机引物等一链cDNA合成所需的所有组分,仅需加入RNA 模板和水即可开始反应。金普来逆转录预混液为第三代逆转录酶,具有更高的酶反应温度,更宽的酶动力学范围,更强的抑制剂耐受性。
由于RNA为单链结构,RNA二级结构中经常存在发夹结构。传统的逆转录酶的反应温度为42℃不能使RNA模版的发夹结构完全打开,反转录得到的cDNA片段不完整。而金普来逆转录酶是在原始逆转录酶基础上经过升级改造得到的,为第三代逆转录酶。金普来逆转录酶反应温度为50℃,能有效的打开RNA的二级结构,使逆转录反应顺利进行,得到完整的cDNA。
RNase H是一种核糖核酸内切酶,可以特异性地水解DNA-RNA杂合链中的RNA。RNase H活性会影响逆转录反应中的引物的与RNA的结合,影响cDNA的产量。金普来逆转录酶无RNase H活性,能够提高逆转录产物的得率。
金普来逆转录预混液中提供dsDNase,能够特异性的消化双链基因组DNA,而对RNA和单链DNA没有影响。
此dsDNase酶具有热敏感性,可在高温条件下快速不可逆地失活。与传统使用DNase I 去除基因组DNA污染的方法相比,dsDNase 无需额外加入EDTA 进行失活,不仅节省实验时间,而且降低了对逆转录反应的抑制。并且相比于传统DNase I金普来dsDNase去除基因组能力更强。
上图中不同DNA酶消化200ng基因组DNA后通过定量PCR检测。绿色为使用传统DNase I消化的扩增曲线,红色为金普来dsDNase消化的扩增曲线。从图中可看出金普来dsDNase消化更加完全。
通常使用Trizol或SDS等RNA提取方法时,RNA中会残留一些逆转录酶的抑制因子,会影响后续的逆转录反应。金普来逆转录酶具有更强的抑制剂的耐受性,使逆转录过程能够顺利高效的完成。
金普来逆转录预混液还具有更宽的酶动力学范围,对低浓度RNA可有效反转,对高浓度RNA无抑制作用。金普来逆转录酶为预混液形式减少少加样步骤,降低污染风险,使用更加方便;两步操作,得率更高。
除逆转录酶之外,金普来还提供双柱法RNA提取试剂盒,RNase清除剂,SYBR qPCR Mix等其他用于基因表达研究的产品。金普来产品具有优异的性能,能够在满足实验需求的同时节省时间,减少操作步骤,提高实验效率。金普来逆转录酶等相关产品均在促销中,如有需要可与我们联系!
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